1. การจำแนกประเภท
เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสแบ่งออกเป็นประเภทแนวตั้ง (รวมถึงคอลัมน์เจลและแผ่นเจล) และประเภทแนวนอน (ส่วนใหญ่เป็นแผ่นเจล) (รูปที่ 6-18) โดยทั่วไป การแยกตามแนวตั้งจะดีกว่าแนวนอนเล็กน้อย แต่การเตรียมเจลแนวนอนมีข้อดีอย่างน้อยสี่ประการ: มีการรองรับอยู่ใต้เจลทั้งหมด ทำให้สามารถใช้อะกาโรสที่มีความเข้มข้นต่ำได้ สามารถเตรียมแผ่นเจล agarose ที่มีคุณสมบัติแตกต่างกันได้ การเตรียมเจลและการบรรจุตัวอย่างจะสะดวกกว่า ห้องอิเล็กโตรโฟรีซิสสร้างได้ง่ายและคุ้มค่า เนื่องจากอิเล็กโตรโฟเรซิสแนวนอนจะดำเนินการโดยใช้แผ่นเจล agarose ที่จมอยู่ใต้น้ำจนสุดใต้พื้นผิวของบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิสประมาณ 1 มม. จึงถูกเรียกว่าอิเล็กโตรโฟรีซิสแบบจุ่ม
ถังอิเล็กโตรโฟรีซิส DYCP-31DN สำหรับอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลอะกาโรส
2.ระบบบัฟเฟอร์
ในการแยกกรดนิวคลีอิก ระบบส่วนใหญ่จะใช้ระบบต่อเนื่อง บัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟเรซิสที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ บัฟเฟอร์ TBE (0.08 โมล/ลิตร Tris·HCl, pH 8.5, กรดบอริก 0.08 โมล/ลิตร, EDTA 0.0024 โมล/ลิตร) และ THE (0.04 โมล/ลิตร Tris·HCl, pH 7.8, 0.02 โมล/ลิตร บัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตต, EDTA 0.0018 โมล/ลิตร) โดยทั่วไปบัฟเฟอร์เหล่านี้จะถูกเตรียมเป็นสารละลายสต๊อก 10x และเจือจางตามความเข้มข้นที่ต้องการเมื่อใช้งาน อัตราการย้ายของ DNA เชิงเส้นและแบบวงกลมใน agarose gel จะแตกต่างกันไปตามบัฟเฟอร์ที่ใช้ ในบัฟเฟอร์ THE อัตราการย้ายของ DNA เชิงเส้นนั้นมากกว่าอัตราการย้ายของ DNA แบบวงกลม ในขณะที่ในบัฟเฟอร์ TBE สิ่งที่ตรงกันข้ามจะเป็นจริง
3.การเตรียมอะกาโรสเจล
(1) การเตรียมเจลอะกาโรสแนวนอน
(a) เตรียมเจลอะกาโรสที่มีความเข้มข้นที่ต้องการโดยใช้บัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิส 1x
(b) ให้ความร้อนอะกาโรสเพื่อละลายจนหมดในอ่างน้ำเดือด บนเครื่องกวนแม่เหล็ก หรือในไมโครเวฟ ทำให้สารละลายอะกาโรสเย็นลงที่อุณหภูมิ 55°C และเติมสีย้อมเอทิเดียมโบรไมด์ (EB) ให้เป็นความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร
(c) ปิดขอบของแก้วหรือแผ่นอะคริลิกด้วยเจลอะกาโรสจำนวนเล็กน้อย เพิ่มหวี และวางฟันหวีไว้เหนือแผ่นประมาณ 0.5~1.0 มม.
(d) เทสารละลายเจลอะกาโรสที่ละลายอย่างต่อเนื่องลงในแม่พิมพ์แก้วหรือแผ่นอะคริลิก (ความหนาขึ้นอยู่กับปริมาตรของตัวอย่าง DNA) เพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้ฟองอากาศเกิดขึ้น ปล่อยให้แข็งตัวตามธรรมชาติที่อุณหภูมิห้อง
(e) ค่อยๆ ถอดหวีออกหลังจากการแข็งตัวสมบูรณ์ เพิ่มบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิสในปริมาณที่เหมาะสมลงในถังเจล โดยต้องแน่ใจว่าแผ่นเจลจมอยู่ใต้น้ำประมาณ 1 มม. ใต้พื้นผิวของบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิส
(2) การเตรียมเจลอะกาโรสแนวตั้ง
(ก) ขจัดคราบไขมันหรือสารตกค้างออกจากแผ่นกระจกโดยการล้างด้วยเอธานอล
(b) วางแผ่นกั้นระหว่างเขื่อนด้านหน้าและด้านหลัง จัดขอบของแผ่นเว้นระยะให้ตรงกับเขื่อนด้านหน้าและด้านหลัง และยึดให้แน่นด้วยแคลมป์
(c) เติม agarose 2% ในบัฟเฟอร์ 1x ระหว่างขอบของแผ่น spacer เพื่อสร้างปลั๊ก agarose สูง 1 ซม. ที่ด้านล่างของห้องหล่อเจล
(d) เทเจลอะกาโรสที่ละลายแล้วตามความเข้มข้นที่ต้องการ ซึ่งเตรียมในบัฟเฟอร์ 1x ลงในห้องเจลที่อยู่ด้านล่างสุดถึง 1 ซม.
(จ) ใส่หวี ระวังไม่ให้ฟองอากาศอยู่ใต้ฟันหวี บางครั้งริ้วรอยอาจปรากฏขึ้นที่ฟันหวีระหว่างการทำความเย็นของเจลอะกาโรส ในกรณีเช่นนี้ เพียงเติมอะกาโรสที่ละลายแล้วลงไปด้านบนเพื่อให้แข็งตัว
(f) ถอดหวีออก เพื่อป้องกันการรั่วไหลของบัฟเฟอร์ในช่องโหลด ให้ปิดผนึกการเชื่อมต่อระหว่างแผ่นเจล agarose และห้องอิเล็กโทรโฟเรซิสด้วย agarose 2% แล้วเติมบัฟเฟอร์ตามจำนวนที่ต้องการ
(g) เติมบัฟเฟอร์อิเล็กโตรโฟรีซิส 1x ลงในห้องเจล
(h) ใส่ตัวอย่าง DNA ลงบนเจลอะกาโรสที่อยู่ใต้บัฟเฟอร์อย่างระมัดระวัง
เราจะแบ่งปันข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับความรู้พื้นฐานเกี่ยวกับ agarose gel electrophoresis ในสัปดาห์หน้า หวังว่าข้อมูลเหล่านี้จะเป็นประโยชน์ต่อการทดสอบของคุณ
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) มีความเชี่ยวชาญในการผลิตเครื่องมืออิเล็กโทรโฟรีซิสมานานกว่า 50 ปีด้วยทีมงานด้านเทคนิคมืออาชีพและศูนย์ R&D ของเราเอง เรามีสายการผลิตที่เชื่อถือได้และครบวงจรตั้งแต่การออกแบบไปจนถึงการตรวจสอบ และคลังสินค้า ตลอดจนการสนับสนุนด้านการตลาด ผลิตภัณฑ์หลักของเรา ได้แก่ Electrophoresis Cell (ถัง/ห้อง), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System ฯลฯ
ขณะนี้เรากำลังมองหาพันธมิตร ยินดีต้อนรับทั้งถังอิเล็กโทรโฟเรซิส OEM และผู้จัดจำหน่าย
หากคุณมีแผนการซื้อผลิตภัณฑ์ของเรา โปรดอย่าลังเลที่จะติดต่อเรา คุณสามารถส่งข้อความถึงเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล]หรือ[ป้องกันอีเมล]หรือกรุณาโทรหาเราที่ +86 15810650221 หรือเพิ่ม Whatsapp +86 15810650221 หรือ Wechat: 15810650221
กรุณาสแกนรหัส QR เพื่อเพิ่มใน Whatsapp หรือ WeChat
เวลาโพสต์: Dec-07-2023