การทดลองอิเล็กโตรโฟรีซิสของเฮโมโกลบิน

หลักการทดลอง

อิเล็กโทรโฟรีซิสของเฮโมโกลบินมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจจับและยืนยันฮีโมโกลบินปกติและผิดปกติต่างๆ

เนื่องจากประจุและจุดไอโซอิเล็กทริกที่แตกต่างกันของฮีโมโกลบินประเภทต่างๆ ในสารละลายบัฟเฟอร์ pH บางตัว เมื่อจุดไอโซอิเล็กทริกของฮีโมโกลบินต่ำกว่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์ เฮโมโกลบินจะมีประจุลบและเคลื่อนตัวไปยังขั้วบวกระหว่างอิเล็กโตรโฟรีซิส ในทางกลับกัน เฮโมโกลบินที่มีประจุบวกจะเคลื่อนไปทางแคโทด

ภายใต้แรงดันไฟฟ้าที่แน่นอนและหลังจากเวลาอิเล็กโตรโฟรีซิสที่เจาะจง ฮีโมโกลบินที่มีประจุและน้ำหนักโมเลกุลต่างกันจะแสดงทิศทางและความเร็วของการโยกย้ายที่แตกต่างกัน ซึ่งช่วยให้สามารถแยกโซนที่แตกต่างกันได้ และสามารถทำการวิเคราะห์ด้วยการสแกนด้วยสีหรืออิเล็กโตรโฟเรติกในโซนเหล่านี้เพื่อหาปริมาณฮีโมโกลบินต่างๆ วิธีที่ใช้กันมากที่สุดคือ pH 8.6 เซลลูโลสอะซิเตตเมมเบรนอิเล็กโตรโฟรีซิส

ภายในไซโตพลาสซึม หมู่เอทิลีนไกลคอล (CHOH-CHOH) ที่มีอยู่ในไกลโคเจนหรือสารโพลีแซ็กคาไรด์ (เช่น มิวโคโพลีแซ็กคาไรด์, mucoproteins, ไกลโคโปรตีน, ไกลโคลิปิด ฯลฯ) จะถูกออกซิไดซ์โดยกรดเป็นระยะและแปลงเป็นกลุ่มอัลดีไฮด์ (CHO-CHO) หมู่อัลดีไฮด์เหล่านี้รวมกับรีเอเจนต์ชิฟฟ์สีแดงอมม่วงที่ไม่มีสี ทำให้เกิดสีย้อมสีม่วงแดงที่สะสมพอลิแซ็กคาไรด์อยู่ในเซลล์ ปฏิกิริยานี้เรียกว่าการย้อมสีด้วยกรด-ชิฟฟ์ (PAS) เป็นระยะ ซึ่งเดิมเรียกว่าการย้อมสีไกลโคเจน

วิธีการทดลอง

วัสดุ:เซลลูโลสอะซิเตตบันทึกเบรน, อุปกรณ์อิเล็กโตรโฟรีซิส(DYCP-38C และแหล่งจ่ายไฟ DYY-6C), เครื่องมือโหลดตัวอย่างที่เหนือกว่า(ปิเปต), สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, คิวเวตต์แบบวัดสี, บัฟเฟอร์

บัฟเฟอร์:

(1) บัฟเฟอร์ pH 8.6 TEB: ชั่งน้ำหนัก 10.29 กรัม ทริส, EDTA 0.6 กรัม, กรดบอริก 3.2 กรัม และเติมน้ำกลั่นเป็น 1,000 มล.

(2) บัฟเฟอร์บอเรต: ชั่งน้ำหนักบอแรกซ์ 6.87 กรัม และกรดบอริก 5.56 กรัม แล้วเติมน้ำกลั่นเป็น 1,000 มล.

ขั้นตอน:

Pการซ่อมแซมสารละลายเฮโมโกลบิน

ใช้เลือด 3 มิลลิลิตรที่มีเฮปารินหรือโซเดียมซิเตรตเป็นสารกันเลือดแข็ง ปั่นแยกที่ 2000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีแล้วทิ้งพลาสมา ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงสามครั้งด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยา (750 รอบต่อนาที ปั่นแยก 5 นาทีในแต่ละครั้ง) ปั่นเหวี่ยงที่ 2200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที แล้วทิ้งส่วนเหนือตะกอนไป เติมน้ำกลั่นในปริมาณที่เท่ากัน จากนั้นเติมคาร์บอนเตตราคลอไรด์ 0.5 เท่าของปริมาตร เขย่าแรงๆ เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นปั่นแยกที่ 2200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อรวบรวมสารละลาย Hb ตอนบนเพื่อใช้ในภายหลัง

การแช่เมมเบรน

ตัดเยื่อเซลลูโลสอะซิเตตเป็นเส้นขนาด 3 ซม. × 8 ซม. แช่ไว้ในบัฟเฟอร์ pH 8.6 TEB จนกระทั่งอิ่มตัวเต็มที่ จากนั้นนำออกและซับให้แห้งด้วยกระดาษกรอง

การจำ

ใช้ปิเปตเพื่อระบุสารละลายฮีโมโกลบิน 10 ไมโครลิตรในแนวตั้งบนเยื่อเซลลูโลสอะซิเตต (ด้านที่หยาบ) ห่างจากขอบประมาณ 1.5 ซม.

อิเล็กโทรโฟเรซิส

เทสารละลายบัฟเฟอร์บอเรตลงในห้องอิเล็กโตรโฟรีซิส วางเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตโดยให้ด้านที่เป็นด่างอยู่ที่ปลายแคโทดของห้อง วิ่งที่ 200 V เป็นเวลา 30 นาที

ชะล้าง

ตัดโซน HbA และ HbA2 ออก ใส่ในหลอดทดลองแยกกัน และเติมน้ำกลั่น 15 มล. และ 3 มล. ตามลำดับ เขย่าเบา ๆ เพื่อชะฮีโมโกลบินออกจนหมด จากนั้นจึงผสมให้เข้ากัน.

การวัดสี

ค่าการดูดกลืนแสงเป็นศูนย์โดยใช้น้ำกลั่นสำหรับสารละลายชะและวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 415 นาโนเมตร

การคำนวณ

HbA2(%) = การดูดกลืนแสงของหลอด HbA2 / (การดูดกลืนแสงของหลอด HbA2 × 5 + การดูดกลืนแสงของหลอด HbA2) × 100%

การคำนวณผลการทดลอง

ช่วงอ้างอิงสำหรับ pH 8.6 TEB บัฟเฟอร์เซลลูโลสอะซิเตตอิเล็กโทรโฟรีซิส: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

หมายเหตุ

เวลาอิเล็กโทรโฟเรซิสไม่ควรนานเกินไป เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตไม่ควรแห้งในระหว่างการอิเล็กโทรโฟรีซิส หยุดอิเล็กโตรโฟรีซิสเมื่อ HbA และ HbA2 แยกจากกันอย่างชัดเจน อิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเวลานานอาจทำให้เกิดการแพร่กระจายของแถบสีและการเบลอได้

หลีกเลี่ยงการใช้ตัวอย่างมากเกินไป ของเหลวฮีโมโกลบินที่มากเกินไปสามารถนำไปสู่การหลุดของแถบสีหรือคราบที่ไม่เพียงพอ ส่งผลให้ระดับ HbA เพิ่มขึ้นอย่างไม่ถูกต้อง

ป้องกันการปนเปื้อนของเยื่อเซลลูโลสอะซิเตทด้วยโปรตีน

กระแสไม่ควรสูงเกินไป มิฉะนั้นแถบฮีโมโกลบินอาจไม่แยกจากกัน

รวมตัวอย่างจากบุคคลปกติและฮีโมโกลบินผิดปกติที่ทราบที่จำเป็นไว้เป็นตัวควบคุมเสมอ

Beijing Liuyi Biotechnology ผลิตถังอิเล็กโตรโฟรีซิสระดับมืออาชีพสำหรับอิเล็กโทรโฟรีซิสฮีโมโกลบินที่เป็นต้นแบบดีซีพี-38ซีถังอิเล็กโทรโฟเรซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตทและมีแหล่งจ่ายไฟอิเล็กโตรโฟรีซิสสองรุ่นสำหรับถังอิเล็กโตรโฟรีซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตDYY-2CและDYY-6Cแหล่งจ่ายไฟ

ในขณะเดียวกัน Beijing Liuyi Biotechnology ได้จัดหาเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตให้กับลูกค้า และสามารถปรับแต่งขนาดของเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตได้ ยินดีต้อนรับสู่ขอตัวอย่างและข้อมูลเพิ่มเติม

แบรนด์ Beijing Liuyi มีประวัติยาวนานกว่า 50 ปีในประเทศจีน และบริษัทสามารถจัดหาผลิตภัณฑ์ที่มีเสถียรภาพและมีคุณภาพสูงทั่วโลก ตลอดหลายปีที่ผ่านมาของการพัฒนา มันคุ้มค่ากับการเลือกของคุณ!

ขณะนี้เรากำลังมองหาพันธมิตร ยินดีต้อนรับทั้งถังอิเล็กโทรโฟเรซิส OEM และผู้จัดจำหน่าย

หากคุณมีแผนการซื้อผลิตภัณฑ์ของเรา โปรดอย่าลังเลที่จะติดต่อเรา คุณสามารถส่งข้อความถึงเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล]หรือ[ป้องกันอีเมล]หรือกรุณาโทรหาเราที่ +86 15810650221 หรือเพิ่ม Whatsapp +86 15810650221 หรือ Wechat: 15810650221