โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสคืออะไร?

โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส

เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสเป็นเทคนิคพื้นฐานในห้องปฏิบัติการในสาขาวิชาชีววิทยา ซึ่งช่วยให้สามารถแยกโมเลกุลขนาดใหญ่ เช่น DNA, RNA และโปรตีนได้ ตัวกลางและกลไกการแยกที่แตกต่างกันช่วยให้แยกเซตย่อยของโมเลกุลเหล่านี้ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นโดยใช้ประโยชน์จากคุณลักษณะทางกายภาพของพวกมัน สำหรับโปรตีนโดยเฉพาะ Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) มักเป็นเทคนิคที่เลือกใช้

PAGE เป็นเทคนิคที่แยกโมเลกุลขนาดใหญ่ เช่น โปรตีน ตามการเคลื่อนที่ของอิเล็กโตรโฟเรติก ซึ่งก็คือความสามารถของสารวิเคราะห์ที่จะเคลื่อนที่ไปยังอิเล็กโทรดที่มีประจุตรงกันข้าม ใน PAGE ค่านี้จะถูกกำหนดโดยประจุ ขนาด (น้ำหนักโมเลกุล) และรูปร่างของโมเลกุล นักวิเคราะห์เคลื่อนผ่านรูพรุนที่เกิดขึ้นในเจลโพลีอะคริลาไมด์ โปรตีนต่างจาก DNA และ RNA ตรงที่มีประจุแตกต่างกันไปตามกรดอะมิโนที่รวมอยู่ ซึ่งสามารถส่งผลต่อวิธีการวิ่งได้ สายกรดอะมิโนอาจสร้างโครงสร้างรองที่ส่งผลต่อขนาดที่ปรากฏและส่งผลให้สามารถเคลื่อนผ่านรูขุมขนได้อย่างไร ดังนั้นบางครั้งอาจเป็นที่พึงปรารถนาที่จะทำลายโปรตีนก่อนที่จะทำอิเล็กโตรโฟเรซิสเพื่อทำให้พวกมันเป็นเส้นตรงหากต้องการการประมาณขนาดที่แม่นยำยิ่งขึ้น

หน้า SDS

Sodium-dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis เป็นเทคนิคที่ใช้ในการแยกโมเลกุลโปรตีนที่มีมวลตั้งแต่ 5 ถึง 250 kDa โปรตีนจะถูกแยกออกจากกันตามน้ำหนักโมเลกุลเท่านั้น โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตซึ่งเป็นสารลดแรงตึงผิวแบบประจุลบถูกเติมลงในการเตรียมเจลเพื่อปกปิดประจุที่แท้จริงของตัวอย่างโปรตีนและให้อัตราส่วนประจุต่อมวลใกล้เคียงกัน กล่าวง่ายๆ ก็คือ มันทำให้โปรตีนเสียสภาพและให้ประจุลบ

หน้าดั้งเดิม

Native PAGE เป็นเทคนิคที่ใช้เจลที่ไม่ทำให้เสียสภาพในการแยกโปรตีน ต่างจาก SDS PAGE ตรงที่ไม่มีการเติมสารทำให้เสียสภาพในการเตรียมเจล เป็นผลให้การแยกโปรตีนเกิดขึ้นตามประจุและขนาดของโปรตีน ในเทคนิคนี้ โครงสร้าง การพับ และสายโซ่กรดอะมิโนของโปรตีนเป็นปัจจัยที่ขึ้นอยู่กับการแยกตัว โปรตีนจะไม่ได้รับความเสียหายในกระบวนการนี้ และสามารถนำกลับมาใช้ใหม่ได้หลังจากการแยกตัวเสร็จสิ้น

โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส (PAGE) ทำงานอย่างไร

หลักการพื้นฐานของ PAGE คือการแยกสารวิเคราะห์โดยส่งผ่านรูขุมขนของเจลโพลีอะคริลาไมด์โดยใช้กระแสไฟฟ้า เพื่อให้บรรลุเป้าหมายนี้ ส่วนผสมอะคริลาไมด์–บิซาคริลาไมด์จะถูกทำปฏิกิริยาโพลีเมอร์ (โพลีอะคริลาไมด์) โดยการเติมแอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟต (APS) ปฏิกิริยาซึ่งถูกเร่งปฏิกิริยาโดยเตตระเมทิลเอทิลีนไดเอมีน (TEMED) ก่อให้เกิดโครงสร้างคล้ายตาข่ายซึ่งมีรูพรุนซึ่งสารวิเคราะห์สามารถเคลื่อนที่ได้ (รูปที่ 2) ยิ่งเปอร์เซ็นต์ของอะคริลาไมด์ทั้งหมดที่รวมอยู่ในเจลสูงเท่าไร ขนาดรูขุมขนก็จะยิ่งเล็กลงเท่านั้น ดังนั้นโปรตีนที่สามารถทะลุผ่านได้ก็จะยิ่งน้อยลงเท่านั้น อัตราส่วนของอะคริลาไมด์ต่อบิซาคริลาไมด์จะส่งผลต่อขนาดรูขุมขนด้วย แต่มักจะคงที่ ขนาดรูพรุนที่เล็กลงยังช่วยลดความเร็วที่โปรตีนขนาดเล็กสามารถเคลื่อนที่ผ่านเจลได้ ทำให้ความละเอียดของพวกมันดีขึ้น และป้องกันไม่ให้พวกมันไหลเข้าไปในบัฟเฟอร์อย่างรวดเร็วเมื่อมีการจ่ายกระแสไฟ

อุปกรณ์สำหรับโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิส

เซลล์เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส (ถัง/ห้อง)
ถังเจลสำหรับโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส (PAGE) แตกต่างจากถังเจลอะกาโรส ถังเจล agarose อยู่ในแนวนอน ในขณะที่ถัง PAGE อยู่ในแนวตั้ง ด้วยเซลล์อิเล็กโทรโฟเรซิสแนวตั้ง (ถัง/ห้อง) เจลบางๆ (ปกติ 1.0 มม. หรือ 1.5 มม.) จะถูกเทระหว่างแผ่นกระจกสองแผ่นและติดไว้เพื่อให้ด้านล่างของเจลจมอยู่ในบัฟเฟอร์ในห้องเดียว และด้านบนจมอยู่ในบัฟเฟอร์ ในอีกห้องหนึ่ง เมื่อใช้กระแสไฟ บัฟเฟอร์จำนวนเล็กน้อยจะเคลื่อนผ่านเจลจากห้องด้านบนไปยังห้องด้านล่าง ด้วยแคลมป์ที่แข็งแรงเพื่อรับประกันว่าชุดประกอบจะอยู่ในตำแหน่งตั้งตรง อุปกรณ์นี้ช่วยให้การทำงานของเจลทำงานได้เร็วโดยมีการระบายความร้อนสม่ำเสมอ ส่งผลให้เกิดแถบที่แตกต่างกัน

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) ผลิตเซลล์อิเล็กโตรโฟรีซิสเจลโพลีอะคริลาไมด์หลายขนาด (ถัง/ห้อง) รุ่น DYCZ-20C และ DYCZ-20G เป็นเซลล์อิเล็กโทรโฟรีซิสแนวตั้ง (ถัง/ห้อง) สำหรับการวิเคราะห์ลำดับดีเอ็นเอ เซลล์อิเล็กโตรโฟเรซิสแนวตั้งบางเซลล์ (ถัง/ห้อง) เข้ากันได้กับระบบซับ เช่น รุ่น DYCZ-24DN, DYCZ-25D และ DYCZ-25E เข้ากันได้กับระบบ Western Blotting รุ่น DYCZ-40D, DYCZ-40G และ DYCZ-40F ซึ่งใช้สำหรับถ่ายโอนโมเลกุลโปรตีนจากเจลไปยังเมมเบรน หลังจากอิเล็กโทรโฟรีซิส SDS-PAGE แล้ว Western Blotting เป็นเทคนิคในการตรวจหาโปรตีนจำเพาะในส่วนผสมโปรตีน คุณสามารถเลือกระบบซับเหล่านี้ได้ตามข้อกำหนดในการทดลอง

แหล่งจ่ายไฟอิเล็กโทรโฟเรซิส
คุณจะต้องมีแหล่งจ่ายไฟแบบอิเล็กโตรโฟรีซิสเพื่อจ่ายไฟฟ้าให้กับเจล ที่ Liuyi Biotechnology เรามีแหล่งจ่ายไฟแบบอิเล็กโตรโฟรีซิสสำหรับการใช้งานทุกประเภท เครื่องรุ่น DYY-12 และ DYY-12C ที่มีแรงดันไฟฟ้าและกระแสไฟเสถียรสูงสามารถตอบสนองความต้องการไฟฟ้าแรงสูงได้ มีฟังก์ชันการยืน การจับเวลา VH และการใช้งานทีละขั้นตอน เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการประยุกต์ใช้อิเล็กโตรโฟเรซิสในการจัดลำดับ IEF และ DNA สำหรับการใช้งานโปรตีนและ DNA อิเล็กโตรโฟรีซิสทั่วไป เรามีรุ่น DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 และอื่นๆ ซึ่งเป็นแหล่งจ่ายพลังงานยอดนิยมที่มีเซลล์อิเล็กโทรโฟรีซิส (ถัง/ห้อง) สิ่งเหล่านี้สามารถใช้สำหรับการใช้งานอิเล็กโตรโฟรีซิสแรงดันปานกลางและต่ำ เช่น ใช้ในห้องปฏิบัติการในโรงเรียน ห้องปฏิบัติการในโรงพยาบาล และอื่นๆ รุ่นอื่นๆ สำหรับพาวเวอร์ซัพพลาย กรุณาเยี่ยมชมเว็บไซต์ของเรา

แบรนด์ Liuyi มีประวัติยาวนานกว่า 50 ปีในประเทศจีน และบริษัทสามารถจัดหาผลิตภัณฑ์ที่มีเสถียรภาพและมีคุณภาพสูงทั่วโลก ผ่านการพัฒนามาหลายปี มันคุ้มค่ากับการเลือกของคุณ!

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับเรา โปรดติดต่อเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล] or [ป้องกันอีเมล].

ข้อมูลอ้างอิงสำหรับโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟรีซิสคืออะไร
1. Karen Steward PhD Polyacrylamide gel electrophoresis, วิธีการทำงาน, เทคนิคต่างๆ และการประยุกต์ใช้งาน