Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) เป็นเทคนิคที่ละเอียดอ่อนและรวดเร็ว ซึ่งส่วนใหญ่ใช้เพื่อตรวจจับความเสียหายของ DNA และการซ่อมแซมในแต่ละเซลล์ ชื่อ "การทดสอบดาวหาง" มาจากลักษณะรูปร่างคล้ายดาวหางที่ปรากฏในผลลัพธ์ โดยนิวเคลียสของเซลล์ก่อตัวเป็น "หัว" ในขณะที่ชิ้นส่วน DNA ที่เสียหายจะย้ายออกไป ทำให้เกิด "หาง" คล้ายดาวหาง
หลักการ
หลักการของการทดสอบดาวหางนั้นขึ้นอยู่กับการอพยพของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในสนามไฟฟ้า DNA ที่สมบูรณ์จะยังคงอยู่ในนิวเคลียสของเซลล์ ในขณะที่ DNA ที่เสียหายหรือกระจัดกระจายจะย้ายไปยังขั้วบวก ก่อตัวเป็น "หาง" ของดาวหาง ความยาวและความเข้มของหางเป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเสียหายของ DNA
ขั้นตอน
- การเตรียมเซลล์: เซลล์ที่จะทดสอบจะถูกผสมกับอะกาโรสที่มีจุดหลอมเหลวต่ำแล้วเกลี่ยบนสไลด์ด้วยกล้องจุลทรรศน์เพื่อสร้างชั้นที่สม่ำเสมอ
- การสลายเซลล์: สไลด์จะถูกจุ่มลงในสารละลายสลายเพื่อกำจัดเยื่อหุ้มเซลล์และเยื่อหุ้มนิวเคลียส เผยให้เห็น DNA
- อิเล็กโทรโฟเรซิส: สไลด์จะถูกวางไว้ในห้องอิเล็กโตรโฟรีซิสภายใต้สภาวะที่เป็นด่างหรือเป็นกลาง ชิ้นส่วน DNA ที่เสียหายจะเคลื่อนตัวไปยังขั้วบวกภายใต้อิทธิพลของสนามไฟฟ้า
- การย้อมสี: หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิส สไลด์จะถูกย้อมด้วยสีย้อมเรืองแสง (เช่น เอทิเดียมโบรไมด์) เพื่อให้เห็นภาพ DNA
- การวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์: ใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์หรือซอฟต์แวร์พิเศษในการวิเคราะห์รูปร่างของดาวหาง และวัดพารามิเตอร์ต่างๆ เช่น ความยาวหางและความเข้ม
ภาพจากไบโอเรนเดอร์
การวิเคราะห์ข้อมูล
ผลลัพธ์จาก Comet Assay ได้รับการประเมินตามพารามิเตอร์หลักหลายประการ:
- ความยาวหาง: แสดงถึงระยะทางที่ DNA เคลื่อนที่ ซึ่งบ่งบอกถึงขอบเขตความเสียหายของ DNA
- เนื้อหา DNA ของหาง: เปอร์เซ็นต์ของ DNA ที่ย้ายเข้าไปที่หาง มักใช้เป็นการวัดความเสียหายของ DNA ในเชิงปริมาณ
- โอลีฟ เทล โมเมนต์ (OTM): รวมทั้งความยาวหางและปริมาณ DNA ของหางเข้าด้วยกันเพื่อให้การวัดความเสียหายของ DNA ครอบคลุมมากขึ้น
การใช้งาน
- การศึกษาความเป็นพิษต่อพันธุกรรม: Comet Assay ใช้กันอย่างแพร่หลายในการประเมินผลกระทบของสารเคมี ยา และการแผ่รังสีต่อ DNA ของเซลล์ ทำให้เป็นเครื่องมือสำคัญในการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรม
- พิษวิทยาสิ่งแวดล้อม: ช่วยในการวิเคราะห์ผลกระทบของมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมต่อ DNA ของสิ่งมีชีวิต ให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับความปลอดภัยของระบบนิเวศ
- การวิจัยทางการแพทย์และคลินิก: Comet Assay ใช้ในการศึกษากลไกการซ่อมแซม DNA มะเร็ง และโรคอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับ DNA นอกจากนี้ยังประเมินผลกระทบของการรักษาโรคมะเร็ง เช่น รังสีรักษาและเคมีบำบัดต่อ DNA
- วิทยาศาสตร์การอาหารและการเกษตร: ใช้เพื่อประเมินความปลอดภัยของยาฆ่าแมลง วัตถุเจือปนอาหาร และสารอื่นๆ และเพื่อศึกษาผลกระทบที่เป็นพิษในสัตว์ทดลอง
ข้อดี
- ความไวแสงสูง: สามารถตรวจจับความเสียหายของ DNA ในระดับต่ำ
- ใช้งานง่าย: เทคนิคตรงไปตรงมา ทำให้เหมาะสำหรับการคัดกรองที่มีปริมาณงานสูง
- ประยุกต์กว้าง: สามารถใช้ได้กับเซลล์หลายประเภททั้งเซลล์สัตว์และพืช
- ความท้าทายด้านปริมาณ: ในขณะที่ให้ข้อมูลเชิงคุณภาพเกี่ยวกับความเสียหายของ DNA การวิเคราะห์เชิงปริมาณอาศัยซอฟต์แวร์และเทคนิคการวิเคราะห์ภาพเป็นอย่างมาก
- เงื่อนไขการทดลอง: ผลลัพธ์อาจได้รับอิทธิพลจากปัจจัยต่างๆ เช่น เวลาอิเล็กโทรโฟเรซิสและ pH ซึ่งจำเป็นต้องมีการควบคุมสภาวะการทดลองอย่างระมัดระวัง
ข้อจำกัด
Comet Assay เป็นเครื่องมืออันล้ำค่าในการวิจัยทางชีวการแพทย์ วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม และการพัฒนายา เนื่องจากมีความยืดหยุ่นและมีความไวสูงในการตรวจจับความเสียหายและการซ่อมแซม DNA Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (เทคโนโลยีชีวภาพ Liuyi)มีห้องอิเล็กโตรโฟรีซิสแนวนอนสำหรับการตรวจวิเคราะห์ดาวหาง ยินดีต้อนรับที่จะติดต่อกับเราเพื่อหารือเกี่ยวกับการทดสอบดาวหางโปรโตคอล.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) มีความเชี่ยวชาญในการผลิตเครื่องมืออิเล็กโทรโฟรีซิสมานานกว่า 50 ปีด้วยทีมงานด้านเทคนิคมืออาชีพและศูนย์ R&D ของเราเอง เรามีสายการผลิตที่เชื่อถือได้และครบวงจรตั้งแต่การออกแบบไปจนถึงการตรวจสอบ และคลังสินค้า ตลอดจนการสนับสนุนด้านการตลาด ผลิตภัณฑ์หลักของเรา ได้แก่ เซลล์อิเล็กโตรโฟเรซิส (ถัง/ห้อง), พาวเวอร์ซัพพลายอิเล็กโทรโฟเรซิส, ทรานส์อิลลูมิเนเตอร์ LED สีฟ้า, ทรานส์อิลลูมิเนเตอร์ UV, เจลอิมเมจ & วิเคราะห์ระบบ ฯลฯ นอกจากนี้เรายังจัดหาเครื่องมือในห้องปฏิบัติการ เช่น เครื่องมือ PCR, เครื่องผสม vortex และเครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับห้องปฏิบัติการ
หากคุณมีแผนการซื้อผลิตภัณฑ์ของเรา โปรดอย่าลังเลที่จะติดต่อเรา คุณสามารถส่งข้อความถึงเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล]หรือ[ป้องกันอีเมล]หรือกรุณาโทรหาเราที่ +86 15810650221 หรือเพิ่ม Whatsapp +86 15810650221 หรือ Wechat: 15810650221
กรุณาสแกนรหัส QR เพื่อเพิ่มใน Whatsapp หรือ WeChat
เวลาโพสต์: Sep-20-2024