หลักการ
อิเล็กโตรโฟเรซิสของฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตตเป็นวิธีการอิเล็กโตรโฟรีซิสโดยใช้ฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตตเป็นตัวรองรับปรากฏการณ์ที่อนุภาคมีประจุเคลื่อนที่ไปยังอิเล็กโทรดฝั่งตรงข้ามภายใต้การกระทำของสนามไฟฟ้าเรียกว่าอิเล็กโตรโฟรีซิสเนื่องจากโปรตีนแต่ละชนิดมีจุดไอโซอิเล็กทริกจำเพาะ หากใส่โปรตีนในสารละลายที่มีค่า pH ต่ำกว่าจุดไอโซอิเล็กทริก โปรตีนนั้นจะมีประจุบวกและเคลื่อนที่ไปยังขั้วไฟฟ้าลบตรงกันข้าม มันเคลื่อนไปขั้วบวกเนื่องจากความเร็วของโมเลกุลโปรตีนที่เคลื่อนที่ในสนามไฟฟ้านั้นสัมพันธ์กับประจุ รูปร่าง และขนาดของโมเลกุล โปรตีนต่างๆ จึงสามารถแยกออกได้ด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิสเซรั่มประกอบด้วยโปรตีนหลายชนิด ซึ่งทั้งหมดมีจุดไอโซอิเล็กทริกที่ pH7.5 หรือน้อยกว่าเมื่อวางซีรั่มในบัฟเฟอร์ pH 8.6 เพื่อดำเนินการอิเล็กโตรโฟรีซิส โปรตีนในซีรั่มทั้งหมดจะมีประจุลบและจะเคลื่อนที่ไปยังด้านบวกในสนามไฟฟ้าเนื่องจากโปรตีนในซีรัมหลายชนิดมีประจุต่างกันที่ pH เท่ากัน อนุภาคโมเลกุลจึงมีขนาดแตกต่างกัน ดังนั้นความเร็วในการย้ายจึงแตกต่างกัน และพวกมันถูกแยกออกจากกันด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิสจุดไอโซอิเล็กทริกและน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนในซีรั่มแสดงอยู่ในตารางด้านล่าง:
| โปรตีน | จุดไอโซอิเล็กทริก (PI) | น้ำหนักโมเลกุล |
| อัลบูมิน | 4.88 | 69 000 |
| α1-กลูลิน | 5.00 น | 200,000 |
| α2-กลูลิน | 5.06 | 300,000 |
| β-กลูลิน | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-กลูลิน | 6.85~7.50 น | 156 000~ 300 000 |
การทดลองนี้เป็นการแยกโปรตีนต่างๆ ในซีรั่มในเลือดโดยใช้เยื่อเซลลูโลสอะซิเตต (ชื่อย่อ CAM) เป็นตัวกลางสนับสนุนCAM เป็นโฟมเหลวชนิดหนึ่งeฟิล์มที่มีความสม่ำเสมอดีและมีความหนา 0.1 มม. - 1.5 มม. ซึ่งมีการดูดซึมน้ำอยู่บ้าง
วัสดุ เครื่องมือ และรีเอเจนต์สำหรับ CAM Electrophoresis
ตัวอย่าง:เซรั่มเลือดมนุษย์ที่แข็งแรง
อุปกรณ์:แหล่งจ่ายไฟ DYY-6C, ถังอิเล็กโทรโฟเรซิส DYCP-38C, การโหลดตัวอย่างที่เหนือกว่า WD-9404
สารรีเอเจนต์
1) เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตท 7X9 ซม
2) สารละลายบัฟเฟอร์ barbitol PH 8.6 (ความแรงไอออนิก 0.05-0.09 เป็นเวลา 0.06tid): ใช้กรด Diethyl barbituric 1,84 กรัม จากนั้นนำ Diethyl Sodium Pentobarbital 1.03 กรัม เติมน้ำกลั่นบางส่วนเพื่อให้ความร้อนละลาย และทำ มากถึง 1,000 มล. ;
3) คราบ: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, เติมน้ำกลั่น 100 มล.
4) TBS/T หรือ PBS/T: เอทานอล 95% 45 มล., กรดอะซิติกน้ำแข็ง 5 มล. เติมน้ำกลั่น 50 มล.
5) น้ำยาทำความสะอาด: เอทานอลปราศจากน้ำ 70 มล., กรดอะซิติกน้ำแข็ง 30 มล.
วิธีการทดลองd
1) เตรียมเมมเบรน: จุ่มเมมเบรนลงในสารละลายบัฟเฟอร์บาร์บิทอล 30 นาที-8 ชม. แล้วนำออก จากนั้นนำสารละลายพิเศษออกด้วยกระดาษดูดซับ
2) การโหลดตัวอย่าง: แยกแยะด้านหยาบและด้านเรียบของเมมเบรน และทำเครื่องหมายเส้นที่ระยะ 1.5 ซม. ถึงปลายด้านบนของด้านหยาบโหลดตัวอย่างด้วยเครื่องมือโหลดตัวอย่างที่เหนือกว่าบนด้านที่หยาบหมายเหตุ: ควรบรรจุตัวอย่างบนด้านที่หยาบของเมมเบรนหลังจากที่ตัวอย่างซีรัมเจาะเข้าไปในเมมเบรนจนหมดแล้ว ให้พลิกเมมเบรน วางด้านที่หยาบ (พร้อมตัวอย่าง) คว่ำหน้าลงไปที่ถัง และปลายที่มีตัวอย่างจะถูกวางในขั้วไฟฟ้าลบ
3) อิเล็กโตรโฟรีซิส: เปิดแหล่งจ่ายไฟ 0.4~เมมเบรน 0.6 ม./ซม. ระยะเวลาในการทำงาน 30-45 นาทีหลังจากใช้งานอิเล็กโตรโฟเรซิส ให้ปิดเครื่อง
4) คราบและทำความสะอาด: นำเมมเบรนออกจากถังแล้วจุ่มลงไปit ลงในสารละลายสีย้อมเป็นเวลา 5 นาที แล้วทำความสะอาดในน้ำยาทำความสะอาดซ้ำแล้วซ้ำอีก 3-4 ครั้งจนสีพื้นหลังชัดเจนควรแสดงโปรตีนในซีรั่มบนแถบ และโดยปกติจะมีห้าโซน เรียงจากปลายบนสุดของเส้นที่ทำเครื่องหมายไว้ ได้แก่ อัลบูมิน α1-กลูลิน α2-กลูลิน เบต้า-กลูลิน γ-กลูลิน
5) การเก็บรักษา : ใส่อิเล็กโตโฟรีซิสแบบแห้งวงดนตรีในน้ำยาทำความสะอาดประมาณ 10-15 นาที แล้วนำออกมาติดบนกระจกที่สะอาด พอแห้ง ก็จะกลายเป็นฟิล์มใสวงดนตรี.
การทดลองผลลัพธ์
ผลการแยกตัวของตัวอย่างซีรั่มเป็นสิ่งที่ดี และไม่มีปรากฏการณ์แถบหางความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์จะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับขั้นตอนการทดสอบและวิธีการของผู้ทดลอง และมีความสามารถในการทำซ้ำสูง
บทสรุป
ระบบตรวจจับอิเล็กโตรโฟรีซิสทางคลินิกอย่างรวดเร็ว (ถังอิเล็กโทรโฟเรซิสดีซีพี-38ซี,แหล่งจ่ายไฟDYY-6C และการโหลดตัวอย่างที่เหนือกว่า WD-9404) ที่ผลิตโดยเราบริษัท ปักกิ่ง หลิวอี้ ไบโอเทคโนโลยี จำกัดตรงตามข้อกำหนดการทดลองและผลลัพธ์สามารถทำซ้ำได้ ง่าย และรวดเร็ว เหมาะสำหรับการสอนวิจัย.
ปักกิ่ง หลิวอี้บริษัท ไบโอเทคโนโลยี จำกัด เชี่ยวชาญในการผลิตผลิตภัณฑ์อิเลคโตโฟรีซิสสำหรับอุตสาหกรรมวิทยาศาสตร์ชีวภาพซึ่งมีประวัติยาวนานกว่า 50 ปีในประเทศจีน และบริษัทสามารถจัดหาผลิตภัณฑ์ที่มีเสถียรภาพและมีคุณภาพสูงทั่วโลกตลอดหลายปีที่ผ่านมาของการพัฒนา มันคุ้มค่ากับการเลือกของคุณ!
ขณะนี้เรากำลังมองหาพันธมิตร ยินดีต้อนรับทั้งถังอิเล็กโทรโฟเรซิส OEM และผู้จัดจำหน่าย
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับเรา โปรดติดต่อเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล]หรือ[ป้องกันอีเมล].
เวลาโพสต์: 14 พ.ย.-2022