ควรคำนึงถึงข้อควรพิจารณาหลายประการเมื่อใช้อิเล็กโทรโฟเรซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต (2)

เราได้แบ่งปันข้อควรพิจารณาหลายประการเมื่อสัปดาห์ที่แล้วสำหรับการใช้อิเล็กโตรโฟรีซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต และเราจะจบหัวข้อนี้ในวันนี้เพื่อให้คุณใช้อ้างอิง

การคัดเลือก ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์

ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ที่ใช้ในอิเล็กโตรโฟเรซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตโดยทั่วไปจะต่ำกว่าความเข้มข้นที่ใช้ในอิเล็กโตรโฟเรซิสแบบกระดาษ ค่า pH ที่ใช้กันทั่วไปคือ 8.6Bโดยทั่วไปจะเลือกบัฟเฟอร์อนุญาโตตุลาการในช่วง 0.05 โมล/ลิตร ถึง 0.09 โมล/ลิตร เมื่อเลือกความเข้มข้น จะมีการพิจารณาเบื้องต้น ตัวอย่างเช่น หากความยาวของแถบเมมเบรนระหว่างอิเล็กโทรดในห้องอิเล็กโทรโฟรีซิสคือ 8-10 ซม. ต้องใช้แรงดันไฟฟ้า 25V ต่อความยาวเมมเบรนหนึ่งเซนติเมตร และความเข้มกระแสควรอยู่ที่ 0.4-0.5 mA ต่อความกว้างของเมมเบรน หากค่าเหล่านี้ไม่บรรลุหรือเกินในระหว่างการอิเล็กโตรโฟรีซิส ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ควรเพิ่มขึ้นหรือเจือจาง

ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ต่ำเกินไปจะส่งผลให้แถบเคลื่อนที่อย่างรวดเร็วและเพิ่มความกว้างของแถบ ในทางกลับกัน ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ที่สูงเกินไปจะทำให้การเคลื่อนตัวของแถบความถี่ช้าลง ทำให้ยากต่อการแยกแยะแถบการแยกบางแถบ

ควรสังเกตว่าในอิเล็กโตรโฟรีซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต ส่วนสำคัญของกระแสจะดำเนินการผ่านตัวอย่าง ซึ่งสร้างความร้อนในปริมาณมาก บางครั้งความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ที่เลือกอาจถือว่าเหมาะสม อย่างไรก็ตาม ภายใต้สภาวะอุณหภูมิสิ่งแวดล้อมที่เพิ่มขึ้นหรือเมื่อใช้แรงดันไฟฟ้าที่สูงขึ้น การระเหยของน้ำเนื่องจากความร้อนอาจรุนแรงขึ้น ส่งผลให้ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์สูงเกินไป และอาจส่งผลให้เมมเบรนแห้งด้วย

ปริมาณตัวอย่าง

ในอิเล็กโตรโฟรีซิสของเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต ปริมาณปริมาตรของตัวอย่างจะถูกกำหนดโดยปัจจัยต่างๆ รวมถึงสภาวะอิเล็กโทรโฟรีซิส คุณสมบัติของตัวอย่าง วิธีการย้อมสี และเทคนิคการตรวจจับ ตามหลักการทั่วไป ยิ่งวิธีการตรวจจับมีความละเอียดอ่อนมากเท่าใด ปริมาณตัวอย่างก็จะยิ่งน้อยลงเท่านั้น ซึ่งเป็นประโยชน์สำหรับการแยกสาร หากปริมาตรตัวอย่างมากเกินไป รูปแบบการแยกด้วยไฟฟ้าอาจไม่ชัดเจน และการย้อมสีก็อาจใช้เวลานานเช่นกัน อย่างไรก็ตาม เมื่อวิเคราะห์เชิงปริมาณแถบสีที่แยกออกจากกันโดยใช้วิธีการตรวจจับการวัดสีแบบชะ ปริมาตรตัวอย่างไม่ควรน้อยเกินไป เนื่องจากอาจส่งผลให้ค่าการดูดกลืนแสงสำหรับส่วนประกอบบางอย่างลดลง นำไปสู่ข้อผิดพลาดที่สูงขึ้นในการคำนวณปริมาณขององค์ประกอบเหล่านั้น ในกรณีเช่นนี้ ควรเพิ่มปริมาตรตัวอย่างอย่างเหมาะสม

โดยทั่วไป ปริมาตรตัวอย่างที่เพิ่มในแต่ละเซนติเมตรของกลุ่มผลิตภัณฑ์ตัวอย่างจะอยู่ในช่วง 0.1 ถึง 5 μL เทียบเท่ากับจำนวนตัวอย่าง 5 ถึง 1,000 μg ตัวอย่างเช่น ในการวิเคราะห์อิเล็กโทรโฟเรซิสโปรตีนในซีรั่มเป็นประจำ ปริมาตรตัวอย่างที่เพิ่มในแต่ละเซนติเมตรของสายการใช้งานโดยทั่วไปจะไม่เกิน 1 μL ซึ่งเทียบเท่ากับโปรตีน 60 ถึง 80 μg อย่างไรก็ตาม เมื่อวิเคราะห์ไลโปโปรตีนหรือไกลโคโปรตีนโดยใช้วิธีอิเล็กโตรโฟรีซิสแบบเดียวกัน ปริมาตรของตัวอย่างจะต้องเพิ่มขึ้นตามลำดับ

โดยสรุป ควรเลือกปริมาตรตัวอย่างที่เหมาะสมที่สุดตามเงื่อนไขเฉพาะผ่านชุดการทดลองเบื้องต้น

การเลือกน้ำยาย้อมสี

แถบที่แยกออกจากกันในอิเล็กโตรโฟเรซิสของเยื่อเซลลูโลสอะซิเตตมักถูกย้อมก่อนการตรวจจับ ส่วนประกอบของตัวอย่างที่แตกต่างกันต้องใช้วิธีการย้อมสีที่แตกต่างกัน และวิธีการย้อมสีที่เหมาะสมสำหรับอิเล็กโตรโฟเรซิสของเยื่อเซลลูโลสอะซิเตตอาจใช้ไม่ได้กับกระดาษกรองทั้งหมด

มีหลักการสำคัญสามประการในการเลือกน้ำยาย้อมสีเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต- ประการแรกสีย้อมที่ละลายน้ำได้ควรเลือกใช้มากกว่าสีย้อมที่ละลายในแอลกอฮอล์เพื่อหลีกเลี่ยงการหดตัวของเมมเบรนและการเสียรูปที่เกิดจากสารละลายย้อมสีหลัง หลังจากการย้อมสี สิ่งสำคัญคือต้องล้างเมมเบรนด้วยน้ำและลดระยะเวลาการย้อมสีให้เหลือน้อยที่สุด มิฉะนั้นเมมเบรนอาจโค้งงอหรือหดตัว ซึ่งจะส่งผลต่อการตรวจจับในภายหลัง

ประการที่สอง ควรเลือกสีย้อมที่มีความสัมพันธ์กับการย้อมสีสูงสำหรับตัวอย่าง ในอิเล็กโทรโฟเรซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตของโปรตีนในซีรั่ม โดยทั่วไปจะใช้อะมิโนแบล็ก 10B เนื่องจากมีสัมพรรคภาพการย้อมสีสูงสำหรับส่วนประกอบโปรตีนในซีรั่มต่างๆ และมีความคงตัวของตัวมัน

ประการที่สาม ควรเลือกสีย้อมคุณภาพที่เชื่อถือได้ สีย้อมบางชนิดแม้จะมีชื่อเดียวกัน แต่อาจมีสิ่งสกปรกซึ่งส่งผลให้พื้นหลังสีเข้มเป็นพิเศษหลังจากการย้อมสี สิ่งนี้อาจทำให้แถบที่แยกจากกันแต่เดิมเบลอได้ ทำให้ยากต่อการแยกแยะ

สุดท้ายนี้ การเลือกความเข้มข้นของสารละลายย้อมสีเป็นสิ่งสำคัญ ตามทฤษฎี อาจดูเหมือนว่าความเข้มข้นของสารละลายการย้อมสีที่สูงขึ้นจะทำให้ส่วนประกอบของตัวอย่างมีการย้อมสีได้ละเอียดยิ่งขึ้น และได้ผลลัพธ์การย้อมสีที่ดีขึ้น อย่างไรก็ตามนี่ไม่ใช่กรณี ความสัมพันธ์ในการยึดเกาะระหว่างส่วนประกอบของตัวอย่างและสีย้อมนั้นมีขีดจำกัดที่แน่นอน ซึ่งจะไม่เพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของสารละลายการย้อมสีที่เพิ่มขึ้น ในทางตรงกันข้าม ความเข้มข้นของสารละลายการย้อมสีที่สูงเกินไปไม่เพียงแต่จะทำให้สีย้อมเสียเปล่า แต่ยังทำให้ได้พื้นหลังที่ชัดเจนได้ยากอีกด้วย ยิ่งไปกว่านั้น เมื่อความเข้มของสีถึงค่าสูงสุดที่กำหนด เส้นโค้งการดูดกลืนแสงของสีย้อมจะไม่เป็นไปตามความสัมพันธ์เชิงเส้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการวัดเชิงปริมาณ ในอิเล็กโทรโฟรีซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต โดยทั่วไปความเข้มข้นของสารละลายการย้อมสีจะต่ำกว่าที่ใช้ในอิเล็กโตรโฟเรซิสแบบกระดาษ

รายละเอียดน่ารู้เกี่ยวกับเทคโนโลยีชีวภาพ Beijing Liuyi-s เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตตถังอิเล็กโตรโฟรีซิสและการประยุกต์ใช้อิเล็กโทรโฟรีซิส กรุณาเยี่ยมชมที่นี่:

ลการทดลองแยกโปรตีนในซีรั่มด้วยเซลลูโลสอะซิเตตเมมเบรน

ลเซลลูโลสอะซิเตตเมมเบรนอิเล็กโทรโฟเรซิส

ลควรคำนึงถึงข้อควรพิจารณาหลายประการเมื่อใช้อิเล็กโทรโฟเรซิสเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตต (1)

หากคุณมีแผนการซื้อผลิตภัณฑ์ของเรา โปรดอย่าลังเลที่จะติดต่อเรา คุณสามารถส่งข้อความถึงเราทางอีเมล[ป้องกันอีเมล]หรือ[ป้องกันอีเมล]หรือกรุณาโทรหาเราที่ +86 15810650221 หรือเพิ่ม Whatsapp +86 15810650221 หรือ Wechat: 15810650221

อ้างอิง:อิเล็กโตรโฟเรซิส (ฉบับที่สอง) โดย Mr. Li